Estrazione dell’RNA totale dai tessuti

Il kit RNAdvance Tissue è un kit reagenti per l’isolamento dell’acido ribonucleico (RNA) basato sulla tecnologia delle biglie paramagnetiche SPRI. Consente di estrarre l’RNA totale da un’ampia gamma di tessuti senza i pericoli e i problemi legati alla rimozione degli scarti dei solventi organici e senza i passaggi, dispendiosi in termini di tempo e lavoro, delle procedure di filtrazione e centrifugazione a vuoto. L’estrazione può essere eseguita manualmente nel formato di una provetta da 2 ml o nel formato da 96 pozzetti o automatizzata nel formato da 96 pozzetti su diverse workstation per la manipolazione dei liquidi Beckman Coulter Biomek. Questo processo di estrazione produce un maggiore recupero di RNA totale rispetto agli approcci tradizionali basati su colonne negli esperimenti condotti per i dati mostrati di seguito.

• Compatibile con applicazioni a valle basate su PCR
• Estrazione e purificazione di RNA di alta qualità da numerosi tipi di tessuti
• Rimozione efficiente di DNA genomico e di altri contaminanti

 

Elevato recupero di RNA da diversi tipi di tessuto senza compromettere la purezza

L’RNA è stato estratto da 10 mg di tessuti del cervello, del fegato, del polmone, del rene o della coda utilizzando RNAdvance Tissue e altri kit disponibili in commercio. Nella Figura 1 (sopra) il rendimento dell’RNA è stato quantificato utilizzando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). RNAdvance Tissue ha recuperato quantità maggiori di RNA dai cinque diversi tipi di tessuto utilizzati rispetto agli altri kit disponibili in commercio. Nella Figura 2 (sopra) i campioni sono stati valutati per la purezza utilizzando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). Per tutti i tipi di tessuti, RNAdvance Tissue ha purificato l’RNA con rapporti A260/280 soddisfacenti.

 

Notevole qualità dell’RNA

L’RNA estratto da 10 mg di tessuto cerebrale con RNAdvance Tissue è stato analizzato con Agilent 2100 Bioanalyzer Eukaryote Total RNA Nano Chip. Nelle Figure 3 e 4 di seguito sono mostrate due tracce di RNA estratto dal tessuto cerebrale. I punteggi RIN erano > 9, indicando che è stato recuperato RNA intatto e di alta qualità.

 

RNAdvance Tissue fornisce RNA adatto alle applicazioni PCR a valle

La capacità di amplificazione della PCR è stata valutata mediante qRT-PCR utilizzando un set di primer (forward primer 5´-ggacttcgagcaagagatgg-3´ e reverse primer 5´-agcactgtgttggcgtacag-3´) progettato per estendere gli esoni 4 e 5 del gene beta (β)-actina (ActB) per produrre 327 ampliconi di coppie di basi. Nella Figura 5 (di seguito) il controllo No RT mostra anche la rimozione del DNA che può interferire con le applicazioni RNA a valle. Nella Figura 6 (di seguito) l’RNA isolato con il kit RNAdvance Tissue è risultato amplificabile, indicando che il kit ha rimosso gli inibitori della PCR. Questi risultati indicano l’usabilità dell’RNA per le applicazioni PCR a valle.

Estrazione dell’RNA da campioni in meno tempo con meno azioni di pipettamento rispetto agli utenti dei kit basati su colonne

La Figura 7 (di seguito) rappresenta il tempo totale per l’estrazione dell’RNA per 1-96 campioni con RNAdvance Tissue e un kit basato su colonne. Con 20 campioni, il tempo totale di estrazione dell’RNA dai tessuti è inferiore con RNAdvance Tissue. Nella Figura 8 (di seguito) il numero totale di azioni di pipettamento, che includono la dispensazione in un campione, la miscelazione di un campione e lo smaltimento dei puntali, per 1, 8, 24, 48 e 96 campioni. Con la possibilità di utilizzare una pipetta multicanale, le azioni di pipettamento sono significativamente inferiori con un numero di campioni maggiore di 8 rispetto a quelle necessarie con kit basati sulle colonne.

Flusso di lavoro visivo di RNAdvance Tissue

 

1. Tessuto di lisi in tampone di lisi e proteinasi K
2. Legame dell’RNA alle biglie magnetiche
3. Separazione delle biglie magnetiche dai contaminanti
4. Lavaggio delle biglie magnetiche con tampone di lavaggio ed etanolo al 70% per la rimozione dei contaminanti
5. Trattamento dei campioni con DNAsi I
6. Rilegame dell’RNA alle biglie magnetiche con tampone di legame
7. Lavaggio delle biglie magnetiche con etanolo al 70% per la rimozione dei contaminanti
8. Eluizione dell’RNA dalle biglie magnetiche
9. Trasferimento nella nuova piastra per la conservazione

 

Per l’uso con metodi manuali o automatizzati basati sulla dimensione del batch o sulla capacità produttiva generale

Tempo di preparazione manuale stimato e tempo totale, in ore, richiesto per eseguire 8, 24 e 96 estrazioni di RNA con RNAdvance Tissue. Le estrazioni possono essere eseguite manualmente o automatizzate su un sistema di manipolazione dei liquidi. Il tempo automatizzato indica l’estrazione eseguita su una workstation Biomek i5 Multichannel 96 Genomics. È indicata la differenza di tempo tra manuale e automazione (NR = non raccomandato).

RNAdvance Tissue			Manuale	Automatizzato
Dimens. batch	8	Tempo di preparazione manuale	0,08	0,25
		Tempo totale	1,00	2,50
	24	Tempo di preparazione manuale	0,11	0,25
		Tempo totale	1,10	2,50
	96 senza DNasi	Tempo di preparazione manuale	NR	0,25
		Tempo totale	NR	2,00
	96	Tempo di preparazione manuale	NR	0,25
		Tempo totale	NR	2,50

 

Prodotti RNAdvance Tissue per l’estrazione di RNA dai tessuti

RNAdvance Tissue è disponibile in kit di tre dimensioni basati sulle tue esigenze di capacità produttiva. Fare clic sul codice (PN) specifico riportato di seguito per acquistare o richiedere un preventivo. Per ulteriori informazioni, consultare la pagina Isolamento dell’RNA da tessuti relativa a RNAdvance Tissue.

CODICE #	NOME	PREPARAZIONI
A32645	Kit RNAdvance Tissue	50
A32649	Kit RNAdvance Tissue	96
A32646	Kit RNAdvance Tissue	384

 

 

Senza indicazione o convalida per l’uso nella diagnosi delle malattie o di altre condizioni.
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