RNAdvance Blood Performance and Data
Estrazione dell’RNA da provette per la raccolta del sangue con stabilizzazione dell’RNA
Il kit RNAdvance Blood è un kit reagenti per l’estrazione dell’acido ribonucleico (RNA) basato sulla tecnologia delle biglie paramagnetiche SPRI. Consente la purificazione dell’RNA di alta qualità dal sangue raccolto utilizzando provette PAXgene. L’estrazione può essere eseguita manualmente nel formato di una provetta da 2 ml o nel formato da 96 pozzetti o automatizzata nel formato da 96 pozzetti su diverse workstation per la manipolazione dei liquidi Beckman Coulter Biomek. L’RNA totale estratto da sangue preservato da PAXgene utilizzando il kit RNAdvance Blood è privo di gDNA rilevabile e altri inibitori della PCR.
- Compatibile con analisi a valle basate su PCR
- Produzione di RNA di alta qualità
- Rimozione efficiente di DNA genomico e di altri contaminanti
Integrità uniforme dell’RNA tra i diversi campioni
I campioni provenivano da tre provette diverse prelevate dallo stesso donatore nello stesso giorno. Tutti i campioni sono stati preparati entro 6 ore dal prelievo ematico e il sangue è stato conservato in ghiaccio o a 4 °C prima dell’estrazione dell’RNA. I punteggi RIN si situavano su una media di 9,4 con una deviazione standard di 0,4 per i 9 campioni preparati. I punteggi RIN sono stati valutati utilizzando un Bioanalyzer 6000 RNA Nano Assay (Agilent).
RNAdvance Blood isola l’RNA con un rendimento più alto rispetto ai kit di altri fornitori
Nella Figura 3 (di seguito), i campioni sono stati quantificati utilizzando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). Il kit RNAdvance Blood ha isolato una quantità doppia di RNA rispetto ai kit dei fornitori B e C. Nella Figura 4 (di seguito) è stata valutata la purezza dei campioni utilizzando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). Le barre di errore rappresentano la deviazione standard di tre replicati tecnici. RNAdvance Blood isola l’RNA adatto all’uso in applicazioni a valle.
RNAdvance fornisce prestazioni coerenti
Nella Figura 5 (di seguito) l’RNA è stato estratto da 6 donatori di 2 utenti differenti nell’arco di 24 ore. I campioni sono stati quantificati utilizzando NanoDrop (Thermo Fisher Scientific). Entrambi gli utenti hanno estratto quantità totali di RNA simili. Le barre di errore rappresentano la deviazione standard di tre replicati tecnici.
RNAdvance elimina il DNA e gli inibitori della PCR per l’uso nelle applicazioni a valle
La capacità per la PCR è stata valutata mediante qRT-PCR utilizzando un set di primer (forward primer 5´-ggacttcgagcaagagatgg-3´ e reverse primer 5´-agcactgtgttggcgtacag-3´) progettato per estendere gli esoni 4 e 5 del gene beta (β)-actina (ActB) per produrre 327 ampliconi di coppie di basi. Nella Figura 6 (di seguito) il controllo No RT mostra anche la rimozione del DNA che può interferire con le applicazioni RNA a valle. Nella Figura 7 (di seguito) l’RNA isolato con il kit RNAdvance Blood è risultato amplificabile, indicando che il kit ha rimosso gli inibitori della PCR.
RNAdvance isola grandi quantità di RNA ad alta qualità dal sangue prelevato in provette PAXgene per un massimo di 4 giorni
L’RNA è stato estratto da 6 donatori per 4 giorni dopo la donazione. Il sangue è stato prelevato in provette PaxGene RNA e conservato a 4 °C. Nella Figura 8 (di seguito) i rendimenti dell’RNA erano costantemente 1 μg di RNA da 400 µl di sangue. Si è registrata una maggiore variabilità del donatore all’estrazione del giorno 2-giorno 4 rispetto al giorno 1. Nella Figura 9 (di seguito) la purezza non è cambiata in modo significativo per tutti i 4 giorni ed è risultata accettabile per le applicazioni a valle. Le barre di errore rappresentano la deviazione standard di tre replicati tecnici.
Flusso di lavoro visivo
- Lisi del sangue raccolto in provette PAXgene in tampone di lisi e proteinasi K
- Legame dell’RNA alle biglie magnetiche
- Separazione delle biglie magnetiche dai contaminanti
- Lavaggio delle biglie magnetiche con tampone di lavaggio ed etanolo al 70% per la rimozione dei contaminanti
- Trattamento dei campioni con DNAsi I
- Rilegame dell’RNA con biglie magnetiche con tampone di legame 2
- Lavaggio delle biglie magnetiche con etanolo al 70% per la rimozione dei contaminanti
- Eluizione dell’RNA dalle biglie magnetiche
- Trasferimento a una nuova piastra
Estrazione dell’RNA da campioni in meno tempo con meno azioni di pipettamento rispetto agli utenti dei kit basati su colonne
La Figura 10 (sopra) rappresenta il tempo totale per l’estrazione dell’RNA per 1-96 campioni con RNAdvance Blood e un kit basato su colonne. Anche con 15 campioni, il tempo totale di estrazione dell’RNA dal sangue è inferiore con RNAdvance Blood. Nella Figura 11 (sopra) il numero totale di azioni di pipettamento, che includono la dispensazione di un campione, la miscelazione di un campione e lo smaltimento dei puntali, per 1, 8, 24, 48 e 96 campioni. Con la possibilità di utilizzare una pipetta multicanale, le azioni di pipettamento sono significativamente minori rispetto a quelle necessarie con kit basati su colonne.
Per l’uso con metodi manuali o automatizzati basati sulla dimensione del batch o sulla capacità produttiva generale
Tempo di preparazione manuale stimato e tempo totale, in ore, richiesto per eseguire 8, 24, 48 e 96 estrazioni di RNA con RNAdvance Blood. I metodi possono essere eseguiti manualmente o automatizzati su una workstation di manipolazione dei liquidi. I dati rappresentati in questa tabella sono basati su una workstation Biomek i7 Hybrid Genomics. È indicata la differenza di tempo tra manuale e automazione (NR = non raccomandato).
| RNAdvance Blood | Manuale | Automatizzato | ||
|---|---|---|---|---|
| Dimens. batch | 8 | Tempo di preparazione manuale | 1,00 | 0,25 |
| Tempo totale | 1,50 | 2,50 | ||
| 24 | Tempo di preparazione manuale | 1,50 | 0,25 | |
| Tempo totale | 2,00 | 2,50 | ||
| 48 | Tempo di preparazione manuale | NR | 0,25 | |
| Tempo totale | NR | 2,50 | ||
| 96 | Tempo di preparazione manuale | NR | 0,25 | |
| Tempo totale | NR | 3,00 | ||
Prodotti RNAdvance Blood per l’estrazione dell’RNA dal sangue
RNAdvance Blood è disponibile in kit di tre dimensioni basati sulle tue esigenze di capacità produttiva. Fare clic sul codice (PN) specifico riportato di seguito per acquistare o richiedere un preventivo. Per ulteriori informazioni, consultare la pagina Isolamento dell’RNA dal sangue relativa a RNAdvance.
| CODICE # | NOME | PREPARAZIONI |
|---|---|---|
| A35603 | Kit RNAdvance Blood | 50 |
| A35605 | Kit RNAdvance Blood | 96 |
| A35604 | Kit RNAdvance Blood | 384 |
Senza indicazione o convalida per l’uso nella diagnosi delle malattie o di altre condizioni.
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